表达和描述功能犬变异的细胞色素b5还原酶。

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罗马GW,克劳利LJ,理发师乔丹

表达和描述功能犬变异的细胞色素b5还原酶。

拱生物化学Biophys。2006年8月1日,452 (1):69 - 82。2006年5月24日Epub。

PubMed ID

16814740 (在PubMed

]

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细胞色素b5还原酶(cb5r)的成员黄素蛋白transhydrogenase家族的氧化还原酶酶,催化转移减少生理捐赠者的等价物,NADH,两个分子的细胞色素b5。我们已经确定正确的核苷酸序列假定的长篇,膜相关酶从犬属后裔,并产生不同的表达系统生产histidine-tagged变体的可溶性,催化硫辛酰胺脱氢酶域,包括残留I33 F300。使用一个简单的两步色谱过程中,重组硫辛酰胺脱氢酶域已纯化同质性和演示了一个简单的黄素蛋白分子质量31364 (m / z),保留NADH:铁氰化物还原酶和NADH:细胞色素b5还原酶的活动。重组蛋白包含一个完整的时尚和展出吸收和CD谱与重组的形式的老鼠细胞色素b5还原酶生成硫辛酰胺脱氢酶域使用一个相同的表达系统,建议类似的蛋白质折叠。氧化还原电位滴定产生一个标准的中点电位(Eo)时尚/ FADH2几-273 + / 5 mV是相同的价值获得了相应的老鼠域。热变性的研究显示,犬类域表现出稳定与鼠蛋白质,确认类似的蛋白质构象。初始速率动力学研究显示犬心肌黄酶域保留明显偏爱NADH和NADPH减少衬底和kcat展出的767和600年代的NADH(1):铁氰化物还原酶和NADH:细胞色素b5还原酶活动,分别与7公里的8和12 microM NADH、K3Fe (CN) 6日分别与细胞色素b5。Spectral-binding常量(Ks)确定各种NAD +类似物显示最高及最低的亲和力是观察APAD + (k = 71 microM)和PCA + (Ks = > 31毫米),分别表示绑定吡啶核苷酸的各个部分的贡献。这些结果提供了第一个完整的正确的顺序,膜相关的c .后裔cb5r并提供一个直接比较两个系统来源的酶使用相同的表达系统,表明酶都有类似的光谱,动力学、热力学、结构性质。

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药物靶点

药物	目标	类	生物	药理作用	行动
NADH	NADH-cytochrome b5还原酶3	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节