组织化学染色和量化dihydrolipoamide脱氢酶使用蓝色原生硫辛酰胺脱氢酶活动页面。

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燕LJ,杨SH、蜀H, Prokai L,福斯特乔丹

组织化学染色和量化dihydrolipoamide脱氢酶使用蓝色原生硫辛酰胺脱氢酶活动页面。

电泳。2007年4月28日(7):1036 - 45。

PubMed ID

17315258 (在PubMed

]

文摘

哺乳动物线粒体dihydrolipoamide脱氢酶(EC 1.8.1.4 DLDH)催化NAD(+)端依赖氧化dihydrolipoamide体内,也可以作为硫辛酰胺脱氢酶催化体外烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)(简化型)端依赖减少传导分子如泛醌和氮蓝四唑(电视台)。在本文中,我们报告一个凝胶组织化学染色方法和量化DLDH硫辛酰胺脱氢酶活动使用蓝色本地页面(BN-PAGE)。老鼠大脑线粒体中提取,用作DLDH的来源,解决了nongradient BN-PAGE(9%),这是紧随其后的是硫辛酰胺脱氢酶活性染色使用NADH作为电子供体和电子受体电视台。结果表明,活性染色的DLDH硫辛酰胺脱氢酶是蛋白质数量和时间。此外,这种凝固态activity-staining方法被证明是在良好的协议与传统的分光光度法测量DLDH脱氢酶活动使用dihydrolipoamide作为衬底。的方法应用于确定水平DLDH硫辛酰胺脱氢酶活性在几个大鼠组织除了大脑,结果表明相似水平的DLDH硫辛酰胺脱氢酶活动的组织。最后,thiol-reactive试剂的影响如N-ethylmaleimide (NEM)和一氧化氮捐助者DLDH硫辛酰胺脱氢酶活动进行评估,证明,通过这种方法,DLDH硫辛酰胺脱氢酶活性可以确定无需移除这些thiol-reactive试剂,否则可能会干扰的光度测量DLDH脱氢酶活性。凝胶的方法还可以被用来作为一种方法来隔离线粒体DLDH所要分析的质谱技术研究DLDH转录后修饰。

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药物靶点

药物	目标	类	生物	药理作用	行动
NADH	Dihydrolipoyl脱氢酶、线粒体	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节