人类镜头thioltransferase:克隆、净化和函数。
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乔F,邢K,刘,埃勒斯医生在N, Raghavachari N,卢MF
人类镜头thioltransferase:克隆、净化和函数。
角膜切削Vis Sci投资。2001年3月,42 (3):743 - 51。
- PubMed ID
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11222536 (在PubMed]
- 文摘
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目的:克隆人类的镜头thioltransferase (TTase)基因和净化,描述和研究的可能功能重组体人镜头thioltransferase (RHLT)。方法:人类镜头TTase克隆利用rt - pcr和基因序列和核糖核酸酶保护试验验证了。TTase过表达在大肠杆菌分离和纯化同质性通过柱色谱法和免疫印迹分析。活动与合成底物羟乙基二硫化验。其功能在dethiolating和重新激活其他关键代谢酶研究了使用纯谷胱甘肽S:转移酶(GST)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)从商业来源和也与兔晶状体上皮细胞的细胞提取preexposed过氧化氢。结果:克隆人类镜头TTase基因显示相同的从其他人体组织TTase基因序列。核糖核酸酶保护试验显示一个记录从人类晶状体上皮细胞的总RNA。纯化RHLT有分子量11.8 kDa和anti-pig肝脏TTase反应积极。它显示类似的结构、功能和动态特征的TTases从其他来源。结果表明:销售税和GPx RHLT有效再生活动,每次被与胱氨酸S-thiolation体外灭活。 Furthermore, RHLT was able to restore the activity of the oxidatively inactivated glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (G-3PD) in H2O2-exposed rabbit lens epithelial cells. CONCLUSIONS: The human lens TTase gene has been cloned for the first time. Its gene product showed the characteristics which support our speculation that TTase may play a major role in maintaining the homeostasis of lens protein thiols thus protecting against oxidative stress.