cDNA克隆,测序,表达和可能的人类顶端核酸酶同源结构域大肠杆菌核酸外切酶III。
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塞其年代,Hatsushika M,渡边,秋山K, Nagao K, Tsutsui K
cDNA克隆,测序,表达和可能的人类顶端核酸酶同源结构域大肠杆菌核酸外切酶III。
Biochim Biophys学报。1992年7月15日,1131 (3):287 - 99。
- PubMed ID
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1627644 (在PubMed]
- 文摘
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互补脱氧核糖核酸编码的人类同系物鼠标顶核酸酶是孤立的从人类骨髓cDNA库通过筛选cDNA鼠标顶端核酸酶。鼠标酶已被证明拥有四种酶的活动,例如apurinic / apyrimidinic酶3 ' 5 '核酸外切酶、DNA 3 '磷酸酶和DNA 3 '修复二酯酶的活动。人类顶端的互补脱氧核酸酶是长1420核苷酸,组成的一个5 ' 205终端端非翻译区核苷酸长,长954核苷酸编码的编码区318个氨基酸残基,3’末端翻译地区长261核苷酸,保利(a)和一个尾巴。确定顶点n端氨基酸序列的核酸酶纯化从海拉细胞表明成熟酶缺乏氨基蛋氨酸。人类顶端核酸酶的氨基酸序列有94%的序列的身份与鼠标先端核酸酶,并显示显著的同源性大肠杆菌核酸外切酶III和肺炎链球菌ExoA蛋白质。人类顶点编码序列的核酸酶被克隆到pUC18 SmaI网站lacZ启动子的控制帧。介绍了构造成BW2001 (xth-11 nfo-2)应变和BW9109(δ次方)细胞的大肠杆菌。转化细胞表达了36.4 kDa多肽(顶点的317氨基酸序列核酸酶由氨基十肽来源于pUC18序列的一部分),和不太敏感methylmethanesulfonate tert-butyl-hydroperoxide比母细胞。构建蛋白质的氨基端区域和顶点核酸酶裂解经常在蛋白质的提取和纯化过程产生31日33到35 kDa c端片段显示启动活动在acid-depurinated DNA和bleomycin-damaged DNA DNA聚合酶。 Formation of such enzymatically active fragments of APEX nuclease may be a cause of heterogeneity of purified preparations of mammalian AP endonucleases. Based on analyses of the deduced amino acid sequence and the active fragments of APEX nuclease, it is suggested that the enzyme is organized into two domains, a 6 kDa N-terminal domain having nuclear location signals and 29 kDa C-terminal, catalytic domain.