T4噬菌体DNA甲基转移酶(N6-adenine)。超表达、纯化和鉴定。
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Kossykh VG, Schlagman SL, Hattman年代
T4噬菌体DNA甲基转移酶(N6-adenine)。超表达、纯化和鉴定。
生物化学杂志。1995年6月16日,270 (24):14389 - 93。
- PubMed ID
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7782299 (在PubMed]
- 文摘
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大坝T4噬菌体基因,编码大坝DNA甲基转移酶(N6-adenine) (MTase),一直subcloned质粒表达载体,pJW2。在这种构造,指定pINT4dam,转录是regulatable噬菌体λ公关和pL推动者,安排。两步纯化方案利用deae纤维素和磷酸纤维素列系列,其次是羟基磷灰石层析,是净化近乎均匀的酶。纯化蛋白的产量是2毫克/ g细胞粘贴。MTase s20, w 3.0 S,斯托克斯半径23和存在于解决方案作为一个单体。S-adenosylmethionine甲基供体的公里,0.1 x 10(6)米,和衬底nonglucosylated公里,unmethylated T4 gt -大坝DNA是1.1 x 10 (-12) M . DNA甲基化的产品,S-adenosyl-L-homocysteine和甲基化DNA,是竞争性抑制剂的反应;Ki值2.4 x 10 (6) M和4.6 x 10(-12)米,分别观察。T4大坝混入甲醇回文tetranucleotide, GATC指定标准序列。然而,在高MTase: DNA比率,T4大坝可以混入甲醇中的序列属于同性恋(Y代表胞嘧啶或胸腺嘧啶)。