NADH过氧化物酶的克隆、序列和超表达从粪链球菌10 c1。结构与二硫化黄素蛋白还原酶的关系。
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罗斯RP,克莱本
NADH过氧化物酶的克隆、序列和超表达从粪链球菌10 c1。结构与二硫化黄素蛋白还原酶的关系。
J杂志。1991年10月5日,221 (3):857 - 71。
- PubMed ID
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1719212 (在PubMed]
- 文摘
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DNA片段编码链球菌NADH NPXase(过氧化物酶)被放大,克隆和测序的基因组粪链球菌(肠球菌)10 c1(写明ATCC 11700)。NPXase基因(npr)包括1341碱基对之前,是一个典型的核糖体结合位点。结构基因的上游,公认的-10年和-35年已确定启动子区域,尽可能有factor-independent终结者,发生在3 '侧翼序列。推导出相对分子质量(= 49551)先生,NPXase的氨基酸组成和等电点是在良好的协议与以前的价值观得到纯化酶。此外,三肽测序总计约20%的蛋白质位于npr基因产物。从序列的测序数据推断NPXase股票低但显著的同源性与黄素蛋白二硫化谷胱甘肽还原酶还原酶的酶从21%硫氧还蛋白还原酶(GRase) 28%。对齐的NPXase大肠杆菌GRase允许三之前报道的识别指纹的时尚,辅酶ii +和中央GRase域,在过氧化物酶序列。此外,Cys42 NPXase,现在作为一个不寻常的稳定cysteine-sulfenic酸氧化的酶,将有利与大肠杆菌的电荷转移半胱氨酸GRase,和两个残留物密切关注FAD-binding折叠附近发现各自的氨基末端。这样的序列特征也可以看到在汞还原酶,lipoamide脱氢酶和trypanothione还原酶,这表明所有这些酶可能分化来自共同的祖先。序列平均50%是相同的与之前报道的三肽相关的链球菌NADH氧化酶也NPXase主要结构的确定,建议这些黄素酶之间的相似性。 Using the E. coli phage T7 expression system the npr gene has now been overexpressed in an E. coli genetic background. The resultant overexpressing clone produced a recombinant NPXase that was catalytically active and immunoreactive to NPXase antisera.