13 c NMR分析cysteine-sulfenic酸氧化还原中心的肠球菌的NADH过氧化物酶。
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起重机EJ 3日Vervoort J,克莱本
13 c NMR分析cysteine-sulfenic酸氧化还原中心的肠球菌的NADH过氧化物酶。
生物化学。1997年7月15日,36 (28):8611 - 8。
- PubMed ID
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9214307 (在PubMed]
- 文摘
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为了描述本机Cys42-sulfenic酸氧化还原中心黄素蛋白NADH过氧化物酶通过核磁共振,表达式协议开发的收益率(3-13C) Cys42-labeled蛋白质数量100毫克。不同光谱的标记-标记酶氧化(E)给出一个峰值为41.3 ppm(相对于二氧六环)代表Cys42-sulfenic酸。减少标记E与1枚NADH air-stable两电子(EH2)物种减少、氧化-减少光谱差异给最大值和最小值在41.3和30.8 ppm,分别对应Cys42-sulfenic酸和硫醇盐物种。E过氧化失活,曾被归因于Cys42-sulfenic酸的氧化Cys42-sulfinic和/或磺酸状态,产生一个新的最大的差光谱Einactive - E为57.0 ppm。类似的表达协议被用来获得[ring-2-13C] His-labeled过氧化物酶HHAA突变(His10His23Ala87Ala258);光谱随pH值变化范围5.8 7。8是归因于去质子化的surface-exposed His23。此外,更换Arg303,氢连着His10, 13 c频段上的没有影响。这些结果提供了直接证据支持过氧化物酶Cys42-sulfenic酸/硫醇氧化还原循环,显著增加我们小protein-sulfenic酸稳定和功能的理解。