纯化和表征,从棒状杆菌sp 5-diketo-D-gluconate还原酶。
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米勒合资,Estell哒,拉撒路RA
纯化和表征,从棒状杆菌sp 5-diketo-D-gluconate还原酶。
生物化学杂志。1987年7月5日;262 (19):9016 - 20。
- PubMed ID
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3597405 (在PubMed]
- 文摘
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2,5-Diketo-D-gluconate还原酶,一种新型酶催化立体定向NADPH-dependent减少2,5-Diketo-D-gluconate 2-keto-L-gulonate,连续的阴离子交换的同质性,净化了汽巴龙蓝色F3GA亲和力和凝胶渗透色谱法从棒状杆菌写明ATCC 31090 sp。分子量的原生形态,取决于凝胶渗透色谱法,是35000 + / - 2000。亚基分子量,由钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳是34000;因此,酶活性单体。π值4.4是测量的酶。氨基和羧基末端序列是一致的,预测的还原酶基因的DNA序列。在25摄氏度,pH值6.4,转化率是500最低为1,和明显的Km值2,5-diketo-D-gluconate和NADPH 26毫米,10 microM,分别。NADPH的酶是具体的,但糖结合位点也将接受5-keto-D-fructose和二羟丙酮作为底物。酶是活跃在一个广泛的pH值范围(pH值5 - 8)减少2,5-diketo-D-gluconate;一把锋利的最佳pH值在9.2是观察2-keto-L-gulonate的氧化。 A Keq value of 5.6 X 10(-13) M indicates that reduction of substrate by NADPH is highly preferred. An activation energy of 12.3 kcal mol-1 is measured. Enzyme turnover is slow relative to dehydration of the gem-diol at C-5 of the substrate.