杆状病毒-昆虫细胞系统中过表达的人视黄酸受体- γ - 1的鉴定和纯化。
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Reddy AP, Chen JY, Zacharewski T, Gronemeyer H, Voorhees JJ, Fisher GJ
杆状病毒-昆虫细胞系统中过表达的人视黄酸受体- γ - 1的鉴定和纯化。
生物化学杂志1992年11月1日;287 (Pt 3):833-40。
- PubMed ID
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1332684 (查看PubMed］
- 摘要
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利用杆状病毒表达系统，在果纹夜蛾(Sf9)细胞中大量表达人视黄酸受体- γ 1 (rar - γ 1)的全长cDNA。Western blot分析显示rar - γ - 1在感染后32 ~ 60 h表达增加。重组受体主要表达为核蛋白，SDS/PAGE和凝胶过滤色谱测定其分子量为50 kDa，与其cdna推导的大小一致。基于配体结合，每个Sf9细胞表达2 x 10(6)个rar - γ - 1分子，其水平约为。是哺乳动物细胞的2000倍。受体经顺序阴离子交换、凝胶过滤和DNA亲和层析部分纯化300倍。过表达受体特异性结合全反式视黄酸(RA)和合成的类视黄酸CD367，具有高亲和力(Kd分别为0.15 nM和0.23 nM)。RA的代谢物4-羟基-RA和4-氧氧-RA在[3H]CD367结合重组RAR-gamma 1 (K(i) > 1 microM)时表现为较差的竞争对手，表明RA的4-氧化大大降低了其对RAR-gamma 1的亲和力。凝胶阻滞分析表明，RAR-gamma - 1特异性结合小鼠RAR-beta基因的RA反应元件。重组杆状病毒(在Sf9细胞中)和痘苗病毒(在HeLa细胞中)表达的rar - γ - 1物种对RA和CD367表现出类似的亲和力，并在凝胶阻滞实验中具有类似的dna结合特性。 Moreover, a similar requirement for additional DNA-binding stimulatory factor(s) was observed in both cases. These results provide a basis for the use of baculovirus-expressed RAR-gamma 1 in further functional and structural studies.