奈瑟菌多糖区淀粉蔗糖酶共价中间体的晶体结构。
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Jensen MH, Mirza O, Albenne C, Remaud-Simeon M, Monsan P, Gajhede M, Skov LK
奈瑟菌多糖区淀粉蔗糖酶共价中间体的晶体结构。
生物化学。2004 3月23日;43(11):3104-10。
- PubMed ID
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15023061 (PubMed视图］
- 摘要
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来自糖苷水解酶家族13的保留α的淀粉蔗糖酶执行从蔗糖到受体分子的葡萄糖部分的转移反应。淀粉蔗糖酶以前已被证明能够使用- d -吡喃葡萄糖氟作为底物，这表明它也可以用于捕获反应中间体进行结晶学研究。本文介绍了具有共价结合吡喃葡萄糖基团的酸/碱催化剂突变体E328Q的晶体结构。蔗糖共晶晶体浸泡与- d -吡喃葡萄糖氟，这导致共价中间体捕获在酶的活性位点。该结构被细化到2.2 a的分辨率，并表明共价中间体的结合导致亲核试剂Asp286位置周围的1 a的主链移动。这种结构揭示了保留α的糖苷水解酶的第一个共价中间体，其中葡萄糖部分与预期的生物学相关实体相同。与其他具有预期的糖基共价中间体的酶的比较表明，这种结构是此类中间体的代表模型。对活性位点的分析显示了寡糖结合如何破坏GH家族水解酶中假定的亲核水结合位点13。这揭示了淀粉蔗糖酶中从水解酶到转糖苷酶功能转变的结构背景的重要部分。