分子克隆、表达和描述一个内生的人类细胞色素P450花生四烯酸epoxygenase同种型。
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泽尔丁,杜布瓦RN, Falck JR Capdevila JH
分子克隆、表达和描述一个内生的人类细胞色素P450花生四烯酸epoxygenase同种型。
拱生物化学Biophys。1995年9月10日,322 (1):76 - 86。
- PubMed ID
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7574697 (在PubMed]
- 文摘
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cDNA包含一个开放阅读框编码人类细胞色素P450花生四烯酸epoxygenase隔绝男性人类肾脏cDNA图书馆。序列分析表明,除了少数例外,这cDNA序列几乎相同的发表对人类肝脏Cyp 2 c8 (s t Okino et al ., 1987年,生物。262年化学,16072 - 16079)和编码490个氨基酸的多肽。核酸杂交表明:(a) Cyp 2 c8和2 c10表达类似的水平在人类肝脏和(b)相比Cyp 2 c10,稳态浓度的Cyp 2 c8记录在人类的肾脏被大大降低。肾脏2 c8 cDNA克隆成pBlue BacIII向量,使用杆状病毒/昆虫细胞Sf9系统表达,重组Cyp 2 c8蛋白质疏水和羟基磷灰石层析纯化。纯化重组Cyp 2 c8和2 c10被重组的NADPH和NADPH-cytochrome P450还原酶,代谢花生四烯酸与蛋白质生成,通过烯烃环氧化作用几乎完全,epoxygenase-derived产品(分别为94和产品总额的90%)。催化营业额(1.05和0.75 nmol产品/ hemoprotein nmol /分钟30摄氏度Cyp 2 c8和2 c10,分别)被抑制的纯化细胞色素b5。新陈代谢重组2 c8既区和拆分11 (R), 12 (S) - 14 (R), 15 (S) -epoxyeicosatrienoic酸(光学纯度82%,每个)。Cyp 2 c8相比,花生四烯酸环氧化作用Cyp 2 c10较少地区,stereo-selective和生成的混合物8 (S), 9 (R) - 11 (S), 12 (R) - 14 (R), 15 (S) -epoxyeicosatrienoic酸(光学纯度的66、69、63%,分别)。重要的是,重组Cyp 2 c8和2 c10环氧大花生四烯酸11日12-olefin相反通过选择性。 Only for Cyp 2C8 did the chirality of the products match that of the enantiomers present, in vivo, in human kidney cortex (A. Karara et al., 1990, FEBS Lett. 268, 227-230). Hence, we propose that Cyp 2C8 is one of the human cytochrome P450 isoforms responsible for the metabolism of endogenous arachidonic acid pools.