描述的野生型和大肠杆菌的活性位点突变体短链酰coa脱氢酶从Megasphaera elsdenii。
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贝克尔DF、Fuchs JA Banfield DK,恐慌WD,麦吉利弗雷RT, Stankovich MT
描述的野生型和大肠杆菌的活性位点突变体短链酰coa脱氢酶从Megasphaera elsdenii。
生物化学。1993年10月12日,32 (40):10736 - 42。
- PubMed ID
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8399220 (在PubMed]
- 文摘
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这项工作的目的是确定的分子机制和监管短链酰coa脱氢酶(许多)Megasphaera elsdenii。为了达到这个目标,从m . elsdenii竹荚鱼的基因编码是克隆和测序。定点诱变是用来识别一个氨基酸残基,需要建议的机制。克隆基因,50 n端氨基酸序列的残留的竹荚鱼elsdenii决心。这个序列信息是利用合成两种混合寡核苷酸引物被用来生成一个120 - bp特定探测器从m . elsdenii DNA聚合酶链反应(PCR)方法。120 - bp探测器用于屏幕m . elsdenii克隆到大肠杆菌基因组DNA库。基因编码m . elsdenii竹荚鱼被发现从这个图书馆,测序,并表示。克隆的竹荚鱼基因含有一个开放阅读框,显示高度的序列的身份与一个开放阅读框的蛋白质序列的人类竹荚鱼和老鼠碳链酰coa脱氢酶(MCAD)(44%和36%相同的残留在人类竹荚鱼和老鼠MCAD成对比较,分别)。重组竹荚鱼表示pUC119向量占35%的大肠杆菌的胞质蛋白粗提取液。表达的蛋白质也有类似的活动,氧化还原电位属性和几乎相同的氨基酸组成本机m . elsdenii竹荚鱼。 In addition, a site-directed Glu367 Gln mutant of SCAD expressed from a pUC119 vector was shown to have minimal reductive and oxidative pathway activity with butyryl-CoA and crotonyl-CoA, respectively.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)