检测蛋白质的6-nitrotryptophan免疫印迹分析及其应用peroxynitrite-treated PC12细胞。

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Ikeda K, Yukihiro Hiraoka B,自制H,松本T, Mineki R,魏H, Takamori K,小川H, Yamakura F

检测蛋白质的6-nitrotryptophan免疫印迹分析及其应用peroxynitrite-treated PC12细胞。

一氧化氮。2007年2月,16 (1):18-28。2006年5月4日Epub。

PubMed ID

16765071 (在PubMed

]

文摘

我们以前报道的形成6-nitrotryptophan反应的活性氮物种与色氨酸残基在人类铜、Zn-superoxide歧化酶(SOD) (f . Yamakura et al ., j。138 (2005) 57 - 69)。在这里,我们报告的准备anti-6-nitrotryptophan抗血清用合成6-nitrotryptophan-conjugated锁眼坚守岗位的血蓝蛋白作为抗原和抗体的纯化使用6-nitrotryptophan-conjugated亲和力列。纯化抗体是免疫反应性的6-nitrotryptophan残渣含有铜、Zn-SOD但不是免疫反应性的铜,Zn-SOD, Mn-SOD,牛血清白蛋白,包含Mn-SOD 3-nitrotyrosine残渣。硝基6-nitrotryptophan降低了连二硫酸钠形成6-aminotryptophan作为主要的产品。减少6-nitrotryptophan残留失去了与抗体的免疫反应性。我们发现不同的免疫反应性的乐队使用抗体之间为3-nitrotyrosine 6-nitrotryptophan残留,残留原油提取的neuron-like PC12细胞处理过氧亚硝基免疫印迹分析。免疫印迹分析二维凝胶电泳显示9集中彩色6-nitrotryptophan残留的免疫反应性的斑点peroxynitrite-treated PC12细胞,它受到胰蛋白酶消化和LC-ESI-MS / MS分析。我们确定了M2丙酮酸激酶,延长因子2,线粒体顺乌头酸酶、丙酮酸羧化酶,和热休克蛋白质HSP90alpha候选人6-nitrotryptophan残留物含有蛋白质,肽覆盖率超过10%,原油提取peroxynitrite-treated PC12细胞。

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药物靶点

药物	目标	类	生物	药理作用	行动
丙酮酸	丙酮酸羧化酶、线粒体	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节