x射线晶体和定点诱变机理的分析形成席夫碱phosphonoacetaldehyde水解酶催化。
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张莫莱斯MC,张G, W,奥尔森DB, Dunaway-Mariano D,艾伦KN
x射线晶体和定点诱变机理的分析形成席夫碱phosphonoacetaldehyde水解酶催化。
J生物化学杂志。2004年3月5日,279 (10):9353 - 61。Epub 2003 12月10。
- PubMed ID
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14670958 (在PubMed]
- 文摘
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Phosphonoacetaldehyde水解酶(phosphonatase)催化水解pci债券乳沟Phosphonoacetaldehyde (Pald)形成正磷酸盐和乙醛。通过席夫碱反应所得中间Lys-53和Pald羰基之间形成的。野生型的x射线晶体结构phosphonatase包裹着Mg(2)单独或与Mg (II) + vinylsulfonate (phosphonoethylenamine模拟)决心2.8和2.4,分别。这些结构被用来确定身份和活性位点残基的位置周围Lys-53铵组和Pald羰基。这些包括Cys-22 His-56,酪氨酸- 128和Met-49。定点诱变是用来确定是否这些团体参与催化。基于速率的贡献,酪氨酸- 128和Cys-22被消除潜在催化组。的Lys-53 epsilon-amino集团定位为与Pald羰基反应,120年与水形成氢键。水120也在氢键距离His-56的咪唑氮和硫原子Met-49。突变体表明His-56动力学常数(k (cat)减少1000倍/ k (m)在阿拉巴马州替换)和Met-49(减少17000倍k (cat) / k (m)在低浓缩铀替换)功能席夫碱催化的形成。 Based on these results, it is proposed that a network of hydrogen bonds among Lys-53, water 120, His-56, and Met-49 facilitate proton transfer from Lys-53 to the carbinolamine intermediate. Comparison of the vinylsulfonate complex versus unliganded structures indicated that association of the cap and core domains is essential for the positioning of the Lys-53 for attack at the Pald carbonyl and that substrate binding at the core domain stabilizes cap domain binding.