K + -translocating Kdp-ATPase从大肠杆菌。纯化、酶学性质和生产的复杂,subunit-specific抗血清。
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K。员工看来,奥腾朵夫说
K + -translocating Kdp-ATPase从大肠杆菌。纯化、酶学性质和生产的复杂,subunit-specific抗血清。
。1988欧元12月1;178 (1):131 - 40。
- PubMed ID
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2849541 (在PubMed]
- 文摘
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Kdp系统从大肠杆菌的高亲和性K +吸收derepressible腺苷三磷酸酶。其膜结合腺苷三磷酸酶活性大约是50 mumol g - 1最低为1级。Kdp-ATPase复杂纯化从翻转囊泡与非离子溶解洗涤剂Aminoxid WS 35紧随其后DEAE-Sepharose CL-6B在酸碱7.5和6.4和凝胶过滤色谱法在Fractogel啧啧hw - 65。活动的总收率为6.5%,纯度至少90%。孤立KdpABC复杂有高亲和力的基质K +(公里应用。= 10 microM)和Mg2 + atp(公里= 80 microM)和一个狭窄的底物特异性。atp酶活性抑制了钒酸(Ki = 1.5 microM),异硫氰酸荧光素(Ki = 3.5 microM), N, N ' -dicyclohexylcarbodiimide (Ki = 60 microM)和N-ethylmaleimide (Ki = 0.1毫米)。净化协议同样适用于隔离的KdpA突变腺苷三磷酸酶与野生型酶表现出增加6毫米的Km值K +和10倍下调了钒酸盐的敏感性。从净化Kdp复杂的单一单元通过凝胶过滤在Bio-Gel p - 100在SDS的存在。本机Kdp-ATPase和SDS-denatured多肽被用来提高多克隆抗体。的特异性抗血清建立了免疫印迹分析。 In functional inhibition studies the anti-KdpABC and anti-KdpB sera impaired ATPase activity in the membrane-bound as well as in the purified state of the enzyme. In contrast, the anti-KdpC serum did not inhibit enzyme activity.