竞争质谱结合分析表征的三个微管蛋白结合位点。
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陆李厘米,Y,安,Narayanan R,米勒DD,道尔顿JT
竞争质谱结合分析表征的三个微管蛋白结合位点。
J质量范围。2010年10月,45 (10):1160 - 6。doi: 10.1002 / jms.1804。
- PubMed ID
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20814887 (在PubMed]
- 文摘
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微管蛋白是一个有吸引力的和已建立的抗癌治疗的目标。到目前为止,唯一的方法来确定绑定的微管蛋白抑制剂已经竞争放射性配体结合试验。我们开发了一个非放射性质谱(MS)结合试验研究秋水仙碱的微管蛋白结合,长春花碱和紫杉醇的这三个结合位点识别哪些小说抑制剂结合。的方法包括一个非常简单的步骤使用超滤分离大分子的飘散的配体。滤液中的游离配体可以准确地确定使用高度敏感和特定的液相色谱串联质谱(质/ MS)方法使用多反应监测(MRM)模式。试验是验证使用足叶草毒素、长春新碱、多烯紫杉醇药物秋水仙碱-竞争,长春花碱-微管蛋白和paclitaxel-binding网站,分别。这竞争结合试验允许可靠地检测这些药物的相互作用和三个微管蛋白的结合位点。这种方法也被应用于确定的tubulin-binding网站4-substituted methoxylbenzoyl-aryl-thiazoles (SMART-H),一个强有力的antitubulin代理在我们实验室开发的。结果表明,SMART-H专门和可逆colchicine-binding站点,而不是长春花碱或紫杉醇网站。这个新的non-radioligand绑定方法来确定微管蛋白结合位点将函数作为一个有用的工具来研究微管蛋白抑制剂的结合位点。