应用基因组学鉴定细菌undecaprenyl焦磷酸合成酶:克隆、表达和描述基本uppS基因。
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Apfel厘米,塔卡克斯B, Fountoulakis M,斯蒂格·M,凯克W
应用基因组学鉴定细菌undecaprenyl焦磷酸合成酶:克隆、表达和描述基本uppS基因。
J Bacteriol。1999年1月,181 (2):483 - 92。
- PubMed ID
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9882662 (在PubMed]
- 文摘
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的prenyltransferase undecaprenyl焦磷酸合成酶(di-trans poly-cis-decaprenylcistransferase;EC 2.5.1.31)纯化可溶性分数的大肠杆菌TSK-DEAE,陶瓷羟磷灰石,TSK-ether Superdex 200, heparin-Actigel色谱法。蛋白质是标记的对光不稳的模拟通过焦磷酸模拟(E, E) - [1-3H] (2-diazo-3-trifluoropropionyloxy)香叶二磷酸和检测钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶作为蛋白质的表观分子量29 kDa。这种蛋白质带被切断从凝胶,胰蛋白酶消化,并受matrix-assisted激光解吸电离质谱分析。比较实验数据的计算机模拟胰蛋白酶消化所有大肠杆菌蛋白质数据产生一个匹配的蛋白质未赋值的函数(SWISS-PROT Q47675;YAES_ECOLI)。与强烈的相似性表明同源蛋白质序列被确定在25个细菌物种,在酿酒酵母和线虫。同源基因(uppS)从大肠杆菌克隆,流感嗜血杆菌,肺炎链球菌,大肠杆菌作为表达伴His-tagged融合蛋白,并在Ni2 +亲和柱纯化。一个未加标签的版本的大肠杆菌uppS基因也克隆和表达,和蛋白质在两色谱纯化步骤。我们能够探测到Upp合成酶所有纯化酶的活动。 Further, biochemical characterization revealed no differences between the recombinant untagged E. coli Upp synthetase and the three His-tagged fusion proteins. All enzymes were absolutely Triton X-100 and MgCl2 dependent. With the use of a regulatable gene disruption system, we demonstrated that uppS is essential for growth in S. pneumoniae R6.