定点诱变效应守恒的天冬氨酸和谷氨酸的大肠杆菌undecaprenyl焦磷酸合酶催化。
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潘JJ,杨LW,梁的PH值
定点诱变效应守恒的天冬氨酸和谷氨酸的大肠杆菌undecaprenyl焦磷酸合酶催化。
生物化学,2000年11月14日,39 (45):13856 - 61。
- PubMed ID
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11076526 (在PubMed]
- 文摘
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Undecaprenyl焦磷酸合成酶(UPPs)催化缩合的焦磷酸八isopentenyl分子通过焦磷酸产生C (55) -undecaprenyl焦磷酸。我们有突变的天冬氨酸和谷氨酸的五守恒的地区(我到V) UPPs蛋白质序列来评估对衬底绑定和催化的影响。突变酶包括D26A E73A、D150A D190A, E198A, E213A, D218A, D223A是伟大的同质性表达和纯化。这些突变酶的动力学分析表明,替换D26地区我和丙氨酸导致10(3)倍减少野生型相比UPPs k (cat)值。IPP K (m)价值只有轻微的变化。的诱变D150A导致更低的IPP亲和力IPP K (m)值50倍比野生型UPPs但并不影响FPP K (m)和K(猫)。E213A突变UPPs有70倍增加IPP K (m), 100倍降低K值(猫)值与野生型相比。这些结果表明,D26地区我是至关重要的催化和D150地区IV IPP绑定中起着重要作用。E213残留在地区V IPP绑定以及催化也很重要。其他突变UPPs酶在本研究中并没有表现出明显的变化(< 5倍)k (cat)除了E73A和D218A。 Both enzymes have 10-fold lower k(cat) value relative to wild-type UPPs.