探索大肠杆菌的构象变化undecaprenyl焦磷酸合酶在催化使用抑制剂和色氨酸突变体。
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陈YH,陈美联社,陈CT,王啊,梁的PH值
探索大肠杆菌的构象变化undecaprenyl焦磷酸合酶在催化使用抑制剂和色氨酸突变体。
J生物化学杂志。2002年3月1日,277 (9):7369 - 76。Epub 2001年12月14日。
- PubMed ID
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11744728 (在PubMed]
- 文摘
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连续Undecaprenyl焦磷酸合成酶(UPPS)催化缩合反应的八个isopentenyl焦磷酸(IPP)通过焦磷酸(FPP)生成C (55) Undecaprenyl焦磷酸(UPP)。在目前的研究中,定点诱变,荧光猝灭和stopped-flow方法被用来检查衬底绑定和蛋白质构象的变化。(S)通过thiopyrophosphate (FsPP), FPP模拟,合成探针与蛋白质相关的酶抑制和事件荧光变化。这种化合物与一个更不稳定的thiopyrophosphate显示K(我)值的0.2 microm抑制大肠杆菌保安作为可怜的衬底,K (cat)值(3.1 x 10(7)(1)) 10(7)乘以小于使用FPP作为衬底。减少蛋白质的固有荧光观察在添加FPP(或FsPP)保安的解决方案。此外,荧光研究使用W91F和其他突变UPPS Trp取代了板式换热器主要表明FPP绑定淬灭了荧光的- 91,残留在alpha3螺旋走向活动网站在衬底绑定。使用stopped-flow装置三相混合蛋白质荧光观察随时间变化的E。FPP复杂与IPP镁(2 +)的存在。然而,在E的绑定。FsPP IPP,只观察到的最快的阶段。这些结果表明,第一阶段是由于IPP绑定到E。FPP complex, and the other two slow phases are originated from the protein conformational change. The two slow phases coincide with the time course of FPP chain elongation from C(15) to C(55) and product release.