赖氨酸残基的作用297年和306年三磷酸核苷调节大肠杆菌CTP合酶:失活2 ',3 '二醛ATP和突变分析。
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麦克劳德TJ,卢恩FA, Bearne SL
赖氨酸残基的作用297年和306年三磷酸核苷调节大肠杆菌CTP合酶:失活2 ',3 '二醛ATP和突变分析。
Biochim Biophys学报。2006年2月,1764 (2):199 - 210。Epub 2005年12月27日。
- PubMed ID
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16427816 (在PubMed]
- 文摘
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胞嘧啶核苷5 '三磷酸合酶(茶多糖)催化ATP-dependent UTP形成CTP使用NH3或谷酰胺氮的来源。确定磷酸腺苷站点的位置在大肠杆菌茶多糖的一级结构,我们使用了亲和标签2 ',3 '二醛腺苷5 '三磷酸(oATP)。oATP不可逆转地灭活茶多糖在一阶,时间依赖方式而ATP酶失活的保护。在10毫米UTP, k(非活性的)和k的值(I)分别为0.054 + / - 0.001分钟(1)和3.36 + / - 0.02毫米,分别。8-3H茶多糖是标签使用(2)oATP随后受到trypsin-catalyzed蛋白水解作用。胰蛋白酶的肽分离使用反相高效液相色谱法,使用n端和两个肽测序(S (492) GDDQLVEIIEVPNH Y(506)和(298)IELPDAY 5:1的比例(K (306)))。后者表明赖氨酸306被oATP修改。更换赖氨酸306年由丙氨酸减少的速度oATP-dependent失活(k(非活性的)= 0.0058 + / - 0.0005分钟(1)、k (I) = 3.7 + / - 1.3毫米)和减少表面的亲和力茶多糖对ATP和UTP的约2倍。的效率K306A-catalyzed glutamine-dependent CTP的形成也减少了2倍,附近的野生型的活动被观察到当NH3底物。这些发现表明,赖氨酸306不是必不可少的ATP绑定,但确实起到了重要的作用在带来的构象变化调节ATP和UTP网站之间的相互作用,和磷酸腺苷站点和谷氨酰胺酰胺之间传输领域。 Replacement of the nearby, fully conserved Lys 297 by alanine did not affect NH3-dependent CTP formation, relative to wild-type CTPS, but reduced k(cat) for the glutaminase activity 78-fold. Our findings suggest that the conformational change associated with binding ATP may be transmitted through the L10-alpha11 structural unit (residues 297-312) and thereby mediate effects on the glutaminase activity of CTPS.