人成纤维细胞蛋白酶连接蛋白II的纯化。
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Van Nostrand WE, Cunningham DD
人成纤维细胞蛋白酶连接蛋白II的纯化。
生物化学学报。1987;26(8):8508-14。
- PubMed ID
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3597385 (PubMed视图]
- 摘要
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正常的人成纤维细胞分泌一种名为蛋白酶连接蛋白II (PN II)的蛋白质，该蛋白质先前被证明与表皮生长因子结合蛋白(EGF-BP)形成十二烷基硫酸钠(SDS)稳定复合物。这些复合物随后与相同的细胞结合，并迅速内化和降解(Knauer, d.j.和Cunningham, D.D. (1982) Proc. Natl。学会科学。美国79,2310-2314)。在这里，我们描述了一种纯化PN II的程序，使其从人成纤维细胞调节的无血清培养基中得到明显的均匀性。第一步采用葡聚糖硫酸盐- sepharose亲和层析。在DEAE-Sepharose上进行离子交换层析，然后在Sephacryl S-400上进行凝胶过滤，进一步纯化。纯化后的PN II序列分析鉴定出33个氨基末端氨基酸;对几个蛋白质序列数据库必威国际app的计算机搜索未能揭示与其他报道的氨基酸序列的同源性。纯化的PN II的表观Mr为106,000，等电点约为7.2。 It retained full activity after incubation in the presence of 0.05% SDS or at a pH of 1.5. PN II formed SDS-stable complexes with EGF-BP, the gamma subunit of 7 S nerve growth factor, and trypsin with estimated Mr of 120,000, 120,000, and 110,000, respectively. PN II was metabolically labeled with [35S]methionine and purified; the metabolically labeled protein formed complexes with EGF-BP. Complexes between purified PN II and EGF-BP bound to human fibroblasts. These results show that the purified protein possesses the properties previously attributed to PN II in cell culture medium.