的活性位点残基突变puromycin-sensitive氨基肽酶:转换酶催化地不活跃的结合蛋白。
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汤普森兆瓦,Govindaswami M,赫斯磅
的活性位点残基突变puromycin-sensitive氨基肽酶:转换酶催化地不活跃的结合蛋白。
拱生物化学Biophys。2003年5月15日,413 (2):236 - 42。
- PubMed ID
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12729622 (在PubMed]
- 文摘
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的活性位点谷氨酸,Glu 309 puromycin-sensitive氨基肽酶突变谷氨酰胺,丙氨酸,缬氨酸。这些突变体具有氨基酸beta-naphthylamides基质和dynorphin(1 - 9)作为替代基质抑制剂。谷氨酸309转换成谷氨酰胺导致5000 - 15000倍降低催化活性。这个残留丙氨酸转换导致25000 - 100000倍活动减少,而谷氨酸缬氨酸突变是最引人注目的,降低催化活性300000 - 500000倍。对催化与戏剧性的影响,所有三个突变产生相对较小(1.5 - 4倍)对底物亲和力的影响。Y394突变的守恒的酪氨酸,苯丙氨酸导致1000倍降低k (cat),影响绑定。直接绑定的生理肽,dynorphin(1 - 9),到E309V突变被凝胶过滤色谱法证明。综上所述,这些数据提供了一种定量评估变异催化谷氨酸的影响,表明突变的残留酶转换成一个不活动的结合蛋白,并且构成证据表明残留物一般的酸/碱催化剂。变异的影响酪氨酸394符合参与的残渣过渡状态稳定。