功能克隆炭疽杆菌自然耐甲氧苄氨嘧啶二氢叶酸还原酶和确认。
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伯恩巴罗电子战,PC,巴罗WW
功能克隆炭疽杆菌自然耐甲氧苄氨嘧啶二氢叶酸还原酶和确认。
Antimicrob代理Chemother。2004年12月,48 (12):4643 - 9。
- PubMed ID
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15561838 (在PubMed]
- 文摘
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炭疽杆菌是据报道自然耐甲氧苄氨嘧啶(TMP)的药物抑制二氢叶酸还原酶(DHFR)、叶酸通路中的一种关键酶。采用微量肉汤试验建立的麦克风TMP对炭疽杆菌Sterne > 2048 <或= 4096 microg /毫升。一个假定的DHFR炭疽杆菌Sterne基因组DNA序列放大。PCR产物被克隆到表达载体pCRT7 / CT-TOPO向量,紧随其后的是转型为大肠杆菌TOP10F化学主管细胞。质粒DNA克隆显示正确的构造与凝血酶裂解位点在下游的终点站克隆PCR产品转化为大肠杆菌BL21 (DE3)明星pLysS主管细胞six-histidine-tagged融合蛋白的表达和纯化His-Bind树脂柱。净化的功能Sterne重组DHFR (Sterne rDHFR)证实建立酶试验。50%抑制浓度的TMP和甲氨蝶呤Sterne rDHFR被发现是77233和12.2海里,分别。观察TMP阻力与大肠杆菌BL21 (DE3)明星pLysS主管与Sterne DHFR基因细胞转化。对齐Sterne DHFR基因氨基酸序列的显示与各种致命炭疽杆菌菌株同源性100%。这些结果证实的自然抵抗炭疽杆菌TMP和澄清,阻力与缺乏染色体编码基因产物的选择性。 These findings will assist in the development of narrow-spectrum antimicrobial agents for treatment of anthrax.