表达式修改人类在大肠杆菌细胞色素P450 2 e1,净化,光谱和催化特性。
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郭Gillam EM, Z, Guengerich FP
表达式修改人类在大肠杆菌细胞色素P450 2 e1,净化,光谱和催化特性。
拱生物化学Biophys。1994年7月,312 (1):59 - 66。
- PubMed ID
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8031147 (在PubMed]
- 文摘
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人类细胞色素P450 2 e1 (P450)感兴趣的,因为它是许多药物的氧化作用和致癌物质。从人类肝脏蛋白质的纯化是困难的,我们报告一个系统的发展相对高层表达大肠杆菌。从肝cDNA cDNA制备聚合酶链反应方法和建立了若干变体与修改5 '末端。七这些分析表明,最高水平的表达式被发现当第一个本地序列的21个基码后立即删除,Trp由此产生的氨基端遇到了阿拉巴马州(GCT)。水平的40-nmol膜结合P450 2 e1(升文化)1例行公事地恢复。重组P450 2 e1提纯电泳细菌膜的均匀性两个离子交换步骤> 80%的收益率。铁P450 2 e1被隔离在一个混合自旋状态。酶是活跃在chlorzoxazone 6-hydroxylation;人类肝细胞色素b5的添加降低了衬底和增加Vmax公里。n端氨基酸序列分析取得了预期的第一21残留。 The expression system should facilitate the availability of human P450 2E1 and antibodies for studies of the enzyme.