在钙调素拮抗剂phenoxybenzamine和melittin存在时，通过Quin 2和内征酪氨酸的止流荧光检测钙调素及其c端或n端半部分的钙释放。心肌肌浆网钙调素依赖性蛋白激酶的抑制作用。
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Suko J, Wyskovsky W, Pidlich J, Hauptner R, Plank B, Hellmann G
在钙调素拮抗剂phenoxybenzamine和melittin存在时，通过Quin 2和内征酪氨酸的止流荧光检测钙调素及其c端或n端半部分的钙释放。心肌肌浆网钙调素依赖性蛋白激酶的抑制作用。
中国生物化学杂志。1986年9月15日;39(3):425- 424。
- PubMed ID
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3758070 (PubMed视图］
- 摘要
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钙调素、完整的牛脑钙调素和各自的phenoxybenzamine配合物或melittin配合物的c端和n端半部分的钙解离用钙螯合剂Quin 2的阻流荧光直接测量，如果可能的话，也用内源性酪氨酸荧光与EGTA混合的蛋白质荧光测量。钙调素c端只含有两个高亲和力的钙结合位点，而钙调素c端和完整钙调素的钙解离是单相的，两种方法得到的钙解离率具有良好的相关性。在C端半部分，Quin 2和内源性酪氨酸荧光的表观速率分别为13.4 s-1和12.8 s-1，在完整的钙调蛋白(pH 7.0, 25℃，100 mM KCl)中，分别为10.5 s-1和10.8 s-1。c端半烷基化导致双相钙解离(Quin 2: kobs分别为1.90 s-1和0.73 s-1;酪氨酸:kobs分别为1.65 s-1和0.61 s-1)。完整钙调蛋白的烷基化导致用Quin 2测量的四相钙解离(kobs 85.3 s-1, 11.1 s-1, 1.92 s-1和0.59 s-1);后两个相被认为代表了高亲和位点的钙释放，因为它们对应于完整烷基化钙调蛋白(kobs分别为2.04 s-1和0.53 s-1)的双相酪氨酸荧光变化以及c端半部分的速率参数。烷基化对钙结合位点的扰动明显降低了钙的解离率，并允许区分两个高亲和位点的解离以及每个钙的解离上的明显构象变化。n端半烷基化导致双相钙释放速率(分别为kobs 153 s-1和10.9 s-1)与完整烷基化钙调蛋白中观察到的相似。用Quin 2测量钙调素-熔浆素或片段-熔浆素复合物的钙解离速率，在c端半部分(kobs 1.12 s-1)较慢且为单相，在n端半部分(kobs 140 s-1和26.8 s-1)为双相，在完整的钙调素中为三相(kobs 126 s-1, 12.1 s-1和1.38 s-1)。 Calmodulin antagonists thus increase the apparent calcium affinity of high and low-affinity sites mainly due to a reduced calcium 'off rate', presumably because of conformation restrictions.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)