小说突变开关3地区的Gsalpha奥尔布赖特遗传性骨营养不良患者损害GDP绑定和受体激活。
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华纳博士,翁G, Yu年代,Matalon R,温斯坦LS
小说突变开关3地区的Gsalpha奥尔布赖特遗传性骨营养不良患者损害GDP绑定和受体激活。
生物化学杂志。1998年9月11日,273 (37):23976 - 83。
- PubMed ID
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9727013 (在PubMed]
- 文摘
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奥尔布赖特遗传性骨营养不良(哦),骨骼异常和肥胖,障碍与杂合的Gsalpha灭活突变基因。小说Gsalpha突变编码替代的色氨酸nonconserved开关3区域内精氨酸(Gsalpha R258W)被发现在一个病人。尽管逆转录-聚合酶链反应的研究表明,mRNA表达野生型和突变等位基因是相似,Gsalpha表达红细胞细胞膜的影响病人降低了50%。一个Gsalpha R258W cDNA、以及与精氨酸取代丙氨酸(Gsalpha R258A),生成,体外转录/翻译产品的生化特性检查。重组与本体膜时,这两个突变体蛋白能刺激腺苷酸环化酶通常在鸟嘌呤核苷- 5 ' - o - (3-thiotriphosphate) (GTPgammaS),但降低了能力的异丙肾上腺素或AlF4——无水三氯化铝和10毫米(混合10 microM氟化钠)。每一个突变的能力将被激活,GTPgammaS或AlF4——被胰蛋白酶保护分析评估。突变体都是保护GTPgammaS但通常显示在AlF4——的存在降低了保护。添加过量的GDP(2毫米)能够拯救AlF4——保护突变体的能力,表明他们可能会减少GDP的亲和力。一个Gsalpha R258A突变纯化大肠杆菌亲和力降低了GDP和明显的GDP释放率10倍比野生型Gsalpha。蔗糖密度梯度分析表明,两种Gsalpha R258W和Gsalpha R258A是热不稳定的温度升高时,变性的突变体是预防的0.1毫米GTPgammaS GDP或2毫米。 The crystal structure of Gsalpha demonstrates that Arg258 interacts with a conserved residue in the helical domain (Gln170). Arg258 substitutions would be predicted to open the cleft between the GTPase and helical domains, allowing for increased GDP release in the inactive state, resulting in enhanced thermolability and reduced AlF4--induced adenylyl cyclase stimulation and trypsin protection, since activation by AlF4- requires bound GDP.