PKC极微小的分子克隆和表征,非典型同种型蛋白激酶C来自体内细胞。
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盛Selbie洛杉矶,Schmitz-Peiffer C, Y,拜登TJ
PKC极微小的分子克隆和表征,非典型同种型蛋白激酶C来自体内细胞。
J生物化学杂志。1993年11月15日,268 (32):24296 - 302。
- PubMed ID
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8226978 (在PubMed]
- 文摘
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蛋白激酶C (PKC) serine-threonine激酶包括至少八个成员的家庭。这些差异表达,显示不同的亲和力为活化剂Ca2 +和脂质等物种,因此认为发挥广泛作用等细胞过程监管的分化、生长、分泌。本研究的目的是确定新分泌细胞中PKC细胞系RINm5F可能激活的脂类代谢的改变伴随nutrient-stimulated胰岛素释放。的碎片cDNA、来自RINm5F细胞信使rna,被聚合酶链反应放大使用退化寡核苷酸引物对应高度保守的地区所有已知的PKCs的催化域。小说这种方法生成的序列也被用于屏幕互补脱氧核糖核酸数据库。整个587 -氨基酸的编码区新PKC同种型,PKC极微小,推导了两个重叠的孤立的从人类肾脏cDNA克隆库。PKC极微小的氨基酸序列显示最大的同源性PKCζ,72%的身份整体上升到84%在催化领域。相比之下,PKC丝毫以其他亚型的同源性并不明显,< 53%的身份甚至在高度保守的催化区域。进一步PKCζ相似性和PKC极微小包括一个高度保守的pseudosubstrate序列,缺乏明显的Ca(2 +)绑定地区的存在只有一个cysteine-rich,锌卫星传回的域。北部污点分析,使用完整的PKC极微小克隆探针,透露一个4.6千碱基成绩单现在主要在肺和大脑,但也表达了在许多组织包括胰岛细胞在较低水平。 In CHO-K1 cells stably expressing the PKC iota cDNA under the human beta-actin promoter, the protein was detected as a 65-kDa band by Western blotting using an antibody to the COOH terminus of PKC zeta (conserved in PKC iota). Extracts of transfected CHO-K1 cells also displayed a significantly increased kinase activity using myelin basic protein as a substrate. The results suggest that PKC iota should be included in the atypical subgroup of PKCs whose definitive member is PKC zeta. As such, PKC iota is unlikely to be activated by the diacylglycerol that is derived from phosphoinositide hydrolysis, but might be a target for novel lipid activators that are elevated during nutrient-stimulated insulin secretion.