蛋白激酶C相关激酶2通过磷酸化调节丙型肝炎病毒RNA聚合酶的功能。
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金世杰，金志华，金毅国，林海生，吴继伟
蛋白激酶C相关激酶2通过磷酸化调节丙型肝炎病毒RNA聚合酶的功能。
中国生物化学杂志，2004年11月26日;279(48):50031-41。Epub 2004 9月13日。
- PubMed ID
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15364941 (PubMed视图］
- 摘要
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丙型肝炎病毒(HCV) NS5B蛋白是HCV RNA基因组复制所需的病毒RNA依赖性RNA聚合酶。我们通过筛选显示在M13噬菌体表面的随机12 mer肽库，将NS5B蛋白固定在微孔板上，确定了一种与蛋白激酶c相关激酶2 (PRK2)的短区域最相似的肽。利用合成肽段的竞争性噬菌体酶联免疫吸附试验表明，显示该肽段的噬菌体克隆与HCV RNA聚合酶具有较高的亲和力。免疫共沉淀和共定位研究证实了NS5B与PRK2的体内相互作用。体外激酶实验表明，PRK2通过与NS5B的n端指结构域(氨基酸1-187)相互作用特异性磷酸化NS5B。与PRK2体外NS5B磷酸化活性一致，我们通过代谢细胞标记检测到了NS5B的磷酸化形式。此外，从HCV亚基因组复制子细胞中析出的HCV NS5B免疫可被抗磷酸丝氨酸抗体特异性识别。使用PRK2特异性小干扰RNA敲除内源性PRK2表达可抑制HCV RNA复制。相反，PRK2的过表达伴随着其活性形式水平的增加，极大地增强了HCV RNA的复制。总之，我们的结果表明，HCV RNA复制受PRK2磷酸化NS5B的调控。