二硫键的作用在MD-2的组装和功能。
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马伦通用电气,肯尼迪MN, Visintin,玛佐,leifei一起CA,戴维斯博士,西格尔DM
二硫键的作用在MD-2的组装和功能。
《美国国家科学院刊a . 2003 4月1;100 (7):3919 - 24。Epub 2003年3月17日。
- PubMed ID
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12642668 (在PubMed]
- 文摘
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MD-2是分泌糖蛋白结合到细胞外的领域toll样受体4 (TLR4)和TLR4的激活需要脂多糖(LPS)。蛋白质包含七个半胱氨酸残基,由异构的disulfide-linked寡聚物。探讨巯基在MD-2结构和功能中的作用,我们创建了17个单个和多个半胱氨酸替换突变体。所有MD-2突变的蛋白质,包括一个完全没有半胱氨酸残基,分泌和稳定。SDSPAGE分析表明,大多数半胱氨酸残基可以参与形成低聚物,没有单一的半胱氨酸残基寡聚化所需。单一半胱氨酸替换,只有C95S和C105S未能给予LPS响应在TLR4突变和TLR4 cotransfected进入细胞表达一个NF-kappaB记者质粒。令人惊讶的是,替换C95和C105部分恢复活动。结构分析表明,C95和C105形成了一个链内的二硫键,而C95本身产生一个不活跃的二聚体。cotransfection实验相比,只有WT MD-2授予响应能力有限合伙人在分泌蛋白直接添加细胞TLR4记者。我们的数据是最符合的模型,可能所有含巯基的躺在一个稳定的表面MD-2核心结构,形成内部和跨链二硫桥。 These disulfide bonds produce a heterogeneous array of oligomers, including some species that can form an active complex with TLR4.