通过鸟枪扫描诱变获得的抗erbb2抗体的抗原结合位点的综合功能图。
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Vajdos FF, Adams CW, Breece TN, Presta LG, de Vos AM, Sidhu SS
通过鸟枪扫描诱变获得的抗erbb2抗体的抗原结合位点的综合功能图。
中华分子生物学杂志，2002 7月5日;32(2):415-28。
- PubMed ID
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12079396 (PubMed视图］
- 摘要
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采用鸟枪扫描组合诱变法研究Fab2C4的抗原结合位点，Fab2C4是一种人源化单克隆抗体片段，可与人癌基因产物ErbB2的胞外结构域结合。基本上，使用噬菌体显示的库对Fab2C4互补决定区(cdr)中的所有残基进行了丙氨酸扫描，这些库优先允许侧链随野生型或丙氨酸而变化。使用允许侧链仅随野生型或类似氨基酸残基变化的文库进行了单独的同源扫描。在结合选择分离功能克隆后，DNA测序用于确定每个不同位置的野生型/突变型比率，这些比率用于评估每个侧链对抗原结合的贡献。丙氨酸扫描显示，大多数有助于抗原结合的侧链位于重链上，Fab2C4的三维结构显示这些残基分为两组。第一组由溶剂暴露的残基组成，这些残基可能与抗原进行能量上有利的接触，从而构成功能结合的表位。第二组由带有侧链的埋藏残基组成，这些侧链与其他CDR残基相结合，显然是作为脚手架来维持功能表位的结合能力构象。同源扫描涉及细微的突变，因此，只有对丙氨酸取代不耐受的侧链子集也对同源取代不耐受。特别是，丙氨酸扫描显示的610a2功能表位表面在用同源取代基映射后缩小到只有369 A2，这表明这一小部分侧链可能与抗原有更精确的接触。该结果验证了鸟枪扫描作为一种快速和准确的方法来确定参与蛋白质-蛋白质相互作用的单个侧链的功能贡献。