中央的函数域链激酶的衬底纤溶酶原对接和处理了定点诱变物。

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乔杜里,Vasudha年代,Rajagopal K, Komath党卫军,加戈N, Yadav M,曼丁哥语SC,萨尼G

中央的函数域链激酶的衬底纤溶酶原对接和处理了定点诱变物。

蛋白质科学。1999;12月8 (12):2791 - 805。

PubMed ID

10631997 (在PubMed

]

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中央的可能作用beta-domain(151 - 287)残留的链激酶(SK)是由网站改变了两个带电残基,以标明丙地区(残留物,230 - 290年)之前被肽走路去激活纤溶酶原(PG)物中发挥关键作用。这些突变体被筛查改变能力激活克分子数相等的“合作伙伴”人类PG,或改变与衬底PG导致整体破坏能力衬底PG处理。最初的八个alanine-linker SK的突变体,一个突变,即SK (KK256.257AA) (SK-D1),显示大约20倍减少PG激活活动相比,野生型大肠杆菌表达的SK (nSK)。其他五个突变体是主动联系,有两个[SK (RE248.249AA)和SK (EK281.282AA),称为SK (C)和SK (H),分别)显示特定的活动大约一半,三分之二,分别的联系。与SK (C)和SK (H),然而,SK (D1)显示动力学的一个扩展的初始延迟PG激活。这些特性时大大加重了两个赖氨酸残基上的指控在256年和257年的报业的位置颠倒了,获得SK (KK256.257EE) [SK (D2)]。这种突变体显示PG激活活动大约10倍低于SK (D1)。值得注意的是,加入少量的人类血纤维蛋白溶酶(PN) PG SK (D2)的活化反应导致戏剧性,PN复兴的PG激活能力存在剂量依赖的相关性,表明它需要预先存在的PN形成功能激活剂,因为它不能影响活性部位暴露在自己的伙伴PG,结论进一步证实了其无法显示“破裂”p-nitrophenol释放的克分子数相等的人类PG和对硝基苯胍基苯甲酸。1:1的稳态动力学参数对高压天然气激活复杂与人类PN透露,尽管它可以形成一个高度功能激活一次“提供”成熟的活性部位,PG的公里nSK-PN相比,增加了近8倍。SK突变体同时携带两年期和three-site charge-cluster改变,即,SK (RE24249AA: EK281.282AA) [SK (CH)], SK (EK272.273AA; EK281.282AA) [SK (FH)],和SK (RE248.249AA; EK272.273AA: EK281.282AA + + +) [SK (CFH)],显示添加剂/协同多个charge-cluster突变对高压天然气激活的影响各自的“单”相比,突变体,与“triple-site”突变(SK (CFH))显示完全没有可检测高压天然气激活能力。 Nevertheless, like the other constructs, the double- and triple-charge cluster mutants retained a native like affinity for complexation with partner PG. Their overall structure also, as judged by far-ultraviolet circular dichroism, was closely similar to that of nSK. These results provide the first experimental evidence for a direct assistance by the SK beta-domain in the docking and processing of substrate PG by the activator complex, a facet not readily evident probably because of the flexibility of this domain in the recent X-ray crystal structure of the SK-plasmin light chain complex.

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药物	目标	类	生物	药理作用	行动
溶栓酶	Plasminogen	蛋白质	人类	是的	激活剂	细节