沼泽红假单胞菌KUGB306 5-氨基乙酰丙酸合成酶的克隆、表达及特性研究。

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蔡惠惠，洪继伟，李克勤，成兴华

沼泽红假单胞菌KUGB306 5-氨基乙酰丙酸合成酶的克隆、表达及特性研究。

中华微生物学杂志，2004年7月15日;23(2):175-81。

PubMed ID

15251194 (PubMed视图

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摘要

从光合细菌palustris Rhodopseudomonas KUGB306的基因组DNA中克隆了编码5-氨基乙酰丙酸合成酶(ALAS)的hemA基因。该基因的推导蛋白(ALAS)含有409个氨基酸。将hemA基因亚克隆到表达载体pGEX-KG中，在大肠杆菌BL21中以谷胱甘肽- s -转移酶(GST)融合蛋白过表达。通过谷胱甘肽- sepharose 4B树脂亲和纯化和凝血酶裂解纯化的融合蛋白，分离出无融合体的重组ALAS。重组ALAS的最适pH值为pH 7.5 ~ 8.0，最适温度为35 ~ 40℃。甘氨酸酶的Km值为2.01 mM，琥珀酰辅酶a酶的Km值为49.55微米。在1 mM范围内，Pb2+、Fe2+、Co2+、Cu2+和Zn2+对酶活性有强烈抑制作用，Mg2+和K+对酶活性有轻微影响。重组ALAS需要pyridoxal 5'-phosphate (PLP)作为辅助因子进行催化。除去这个辅助因子会导致活性的完全丧失。用ALAS进行的紫外可见光谱分析表明，酶与PLP之间存在aldimine连接。

引用本文的药物库数据

药物靶点

药物	目标	种类	生物	药理作用	行动
磷酸吡哆醛	5-aminolevulinate合酶	蛋白质	人类	未知的	代数余子式	细节
磷酸吡哆醛	5-氨基乙酰丙酸合成酶，红细胞特异性，线粒体	蛋白质	人类	未知的	代数余子式	细节