通过噬菌体展示和分子模型鉴定糖尿病自身抗原GAD65的构象表位。
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Myers MA, Davies JM, Tong JC, Whisstock J, scaily M, Mackay IR, Rowley MJ
通过噬菌体展示和分子模型鉴定糖尿病自身抗原GAD65的构象表位。
中华免疫杂志2000 10月1日;165(7):3830-8。
- PubMed ID
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11034389 (PubMed视图］
- 摘要
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糖尿病的主要自身抗原谷氨酸脱羧酶(GAD65)与柯萨奇B型病毒的P2C蛋白有一个序列相似的区域，包括6个相同的残基PEVKEK，这表明柯萨奇B型病毒与GAD65之间的交叉反应可引发自身免疫性糖尿病。我们利用人胰岛细胞单克隆抗体MICA3和MICA4，通过噬菌体随机肽库筛选GAD65的Ab表位。鉴定的肽序列可以映射到GAD65的磷酸吡哆醛(PLP)结合域的同源模型。对于MICA3，在PLP结合域以及GAD65的C端区域中发现了一个包含PEVKEK序列的表面环和两个相邻的暴露螺旋，该区域之前被认为是MICA3结合的关键区域。为了确认包含PEVKEK序列的环有助于MICA3表位，通过诱变删除了该环。这使MICA3的结合减少了70%。使用MICA4选择的肽序列富含碱性或含羟基氨基酸，而已知对MICA4结合至关重要的Lys358周围的GAD65 plp结合域表面同样富含这些氨基酸。与MICA4反应最活跃的两种噬菌体编码基序VALxG，与MICA4相反的LAV位于同一区域。因此，我们结合噬菌体展示、分子建模和诱变技术，在GAD65上定义了MICA3和MICA4表位，并为MICA3表位中PEVKEK环的参与提供了强有力的证据。