开发一个简单的大规模筛选协议基于生物合成的结核分枝杆菌谷氨酰胺合成酶的活性的新型抑制剂的识别。
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辛格U, Sarkar D
开发一个简单的大规模筛选协议基于生物合成的结核分枝杆菌谷氨酰胺合成酶的活性的新型抑制剂的识别。
J Biomol屏幕。2006;12月11日(8):1035 - 42。Epub 2006年9月14日。
- PubMed ID
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16973920 (在PubMed]
- 文摘
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大规模筛选协议已经开发了结核分枝杆菌谷氨酰胺合成酶无机磷酸盐的定量估计。K (m)的值确定的pH值6.8是22毫米L-glutamic酸,NH (4) Cl 0.75毫米,3.25毫米MgCl(2)和三磷酸腺苷的2.5毫米。谷氨酰胺的K (m)值影响显著的增加,pH值的测定缓冲区。在衬底的饱和水平,酶活性在pH值6.8和25摄氏度是发现线性3 h。减少酶活性可以忽略甚至在10% DMSO溶液的存在。发现Z因子和信噪比是0.75和6.18,分别时酶用于62.5 microg /毫升浓度。获得的IC(50)值在pH值为6.8 L-methionine S-sulfoximine DL-phosphothriacin 500 microM和30 microM,分别,这是比在其他pH值获得最低的水平。贝克曼库尔特高通量筛选平台发现需要5 h 9分钟才能完成60个盘子的筛查。对于每个检测板,板用于复制品规范化数据。筛选1164天然产品分数/提取和合成分子从一个内部图书馆能够识别12样品确认。,验证数据筛选的小型图书馆的内部加上Z”和信噪比的值表明,协议是健壮的大规模筛选不同的化学库。