隔离一个基因编码一个人类减少叶酸载体(RFC1)和分析其表达transport-deficient, methotrexate-resistant人类乳腺癌细胞。
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莫斯科JA,龚M,他R, Sgagias可,迪克森KH Anzick SL, Meltzer PS,考恩KH
隔离一个基因编码一个人类减少叶酸载体(RFC1)和分析其表达transport-deficient, methotrexate-resistant人类乳腺癌细胞。
癌症研究》1995年9月1;55 (17):3790 - 4。
- PubMed ID
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7641195 (在PubMed]
- 文摘
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我们实验室曾报道了隔离的小鼠cDNA恢复减少叶酸载体(RFC)活动和甲氨蝶呤(MTX)敏感性MTX-resistant, transport-deficient人类乳腺癌细胞系(MTXR zr - 75 - 1) (k . h . Dixon et al .,生物。化学。,269:17 - 20,1994)。使用这种小鼠cDNA探针,我们有孤立的两个同源重叠部分互补dna从人类睾丸cDNA图书馆。此外,使用人类cDNA探针,我们有孤立的人类基因组片段包含20 kb RFC编码区域。这些克隆的核苷酸序列分析显示,人类的RFC基因,RFC1,大约有65%同源基因小鼠和仓鼠。使用一个人类基因组包含RFC1 P1质粒克隆,我们绘制的位置RFC1通过荧光原位杂交的21号染色体的长臂(21 q22.2-q22.3)。荧光原位杂交分析还表明,两份MTXR RFC1在场的zr - 75 - 1细胞,并显示没有证据表明这个基因的重排。北部的污点分析MTXR zr - 75 - 1细胞表现出明显的水平下降3 kb RFC1记录相对于父母的细胞系,用多克隆抗体和免疫印迹分析提出对RFC1产生的肽序列显示减少的表达一个大约56000 (r)在MTXR zr - 75 - 1细胞蛋白质。最后,MTXR zr - 75 - 1细胞转染RFC1基因显示MTX吸收,增加竞争更敏感的叶酸,叶酸。 Therefore, decreased RFC1 expression appears to be the molecular mechanism of decreased MTX uptake in this MTX-resistant cell line.