用氨基酸测序和质谱鉴定3h标记的2-乙基萘失活P450 2B1和2B4的活性位点多肽。
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Roberts ES, Hopkins NE, Zaluzec EJ, Gage DA, Alworth WL, Hollenberg PF
用氨基酸测序和质谱鉴定3h标记的2-乙基萘失活P450 2B1和2B4的活性位点多肽。
生物化学。1994 3月29日;33(12):3766-71。
- PubMed ID
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8142377 (PubMed视图］
- 摘要
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2-乙基萘(2EN)是一种基于机制的大鼠细胞色素P450 (P450) 2B1失活剂，每摩尔失活P450加合物结合1.3 mol [Roberts, e.s.， Hopkins, N.E, Alworth, w.l.， & Hollenberg, P.F.(1993)化学。Res. Toxicol. 6,470 -479]。进一步的研究表明，2EN也是兔P450 2B4 7-乙氧基香豆素o -脱乙基酶活性的有效机制灭活剂，加合物每摩尔P450结合0.83 mol。用溴化氰裂解[3H] 2en灭活的2B1，用高效液相色谱分离多肽，用三辛-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进一步纯化放射性标记的部分，通过放射自显影鉴定了放射性标记的多肽(M(r)约3000)。对该蛋白前12个n端残基进行氨基酸序列分析，发现ISLLSLFFAGTE序列对应于蛋白290-301位。采用基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)对HPLC分离得到的放射性标记组分进行分析，在m/z 2722.5和2890.6处检测到峰。较低的质量峰对应于溴化氰肽Ile290到Met314的分子离子(平均质量)(理论为2722.2)，而较高的质量峰对应于具有结合的2-萘乙酰基的同一肽(理论为2890.4)。用溴化氰处理[3H] 2en灭活的2B4，用高效液相色谱法分离多肽，用Tricine-SDS-PAGE分析各组分，用放射自显影法鉴定了两个放射性标记的多肽(M(r) = 5000和8000)。氨基酸序列分析显示，前11个残基的n端与EKDKSDPSSEF序列相同，对应于273 ~ 283位。(摘要删节至250字)