cDNA克隆、表达、纯化、分布、以及生物活性犬丙氨酸aminotransferase-1的表征。
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陆Rajamohan F,那里提取L,乔斯林DL、B,里根WJ劳顿M
cDNA克隆、表达、纯化、分布、以及生物活性犬丙氨酸aminotransferase-1的表征。
蛋白质Expr Purif。2006年7月,48 (1):81 - 9。Epub 2006年1月30日。
- PubMed ID
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16495081 (在PubMed]
- 文摘
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丙氨酸转氨酶(ALT)是一种吡哆醛酶发现主要在肝脏和肾脏,也有少量的心脏,肌肉,脂肪,和大脑。血清转氨酶活动已被广泛用作替代标记物组织损伤和疾病在人类和兽医临床设置和化学品和药品的安全评估。因为它的相对丰度在肝脏,增加血清ALT活性通常被认为是表明肝损伤。已知两个ALT同功酶,ALT1 ALT2,并从人类克隆和测序,老鼠,和鼠标。在这项研究中,我们已经克隆了互补DNA编码的犬orthologue ALT1 (cALT1)。完整的cDNA序列由1852基地和包含一个1485 -基地开放阅读框,编码494个氨基酸残基的多肽。犬ALT1股价87.7,87.2,87.0%氨基酸人类身份,老鼠和老鼠orthologues分别。互补脱氧核糖核酸在大肠杆菌表达,氨基端(6 x)标签,和重组酶使用固定化metal-affinity色谱纯化。的最终产量纯化重组cALT1大于5 mg / L的文化。丙氨酸氨基转移酶活性的纯化cALT1为229.81 u /毫克的蛋白质,这是大约38倍高于总可溶性重组大肠杆菌细胞溶解产物,确认酶功能ALT。评估各种犬类组织通过rt - pcr显示ALT1水平表达的顺序是:心脏>肝脏>脂肪大约大脑大约腓肠肌>肾脏。 The purified cALT1 will be helpful to develop isoenzyme-specific anti-bodies, which could further improve the diagnostic resolution of current ALT assays in drug safety studies.