解决多个底物结合位点在细胞色素P450 3 a4: es复合物的化学计量学探索的烦恼和工作的滴定。

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Halpert JR, Fernando H达维多夫博士

解决多个底物结合位点在细胞色素P450 3 a4: es复合物的化学计量学探索的烦恼和工作的滴定。

生物化学。2006年4月4日,45 (13):4199 - 209。

PubMed ID

16566594 (在PubMed

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探索正合机制协同在人类细胞色素P450 3 a4 (CYP3A4)我们研究酶的相互作用与1-pyrenebutanol (1 pb) 1-pyrenemethylamine (PMA)的烦恼和溴麦角环肽底物荧光团血红素,通过吸光度光谱。这些方法结合的创新设置titration-by-dilution和连续变化(工作的滴定法)实验允许我们探测衬底之间的关系绑定和随后的自旋过渡造成1 pb或溴麦角环肽ⅱ型PMA引起的光谱变化。1-PB-induced旋转CYP3A4的转变显示突出的正合协同,特点是一个希尔系数1.8 + / - 0.3 (S50 = 8.0 + / - 1.1 microM)。相比之下,CYP3A4的交互与溴麦角环肽或PMA揭示不协调,展示KD值0.31 + / - 0.08 microM和7.1 + / - 2.3 microM,分别。绑定的所有三个基板监控烦恼在titration-by-dilution实验:酶底物的比例1揭示了一个简单的双分子的相互作用与KD值0.16 + / - 0.09,4.8 + / - 1.4,和0.18 + / - 0.09 microM 1 pb, PMA,分别和溴麦角环肽。相应地,工作的滴定实验表明,1-PB-induced旋转转变反映了形成一个复杂的两个底物分子的酶,而溴麦角环肽和PMA展览1:1结合化学计量学。结合工作的滴定的结果与KD的价值中获得我们的烦恼实验,我们证明CYP3A4的交互与1 pb服从顺序绑定机制,在旋转转变引发的绑定1 pb的低亲和力的网站,它成为可能只有在饱和的高亲和性的网站。

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药物酶

药物	酶	类	生物	药理作用	行动
溴麦角环肽	细胞色素P450 3 a4	蛋白质	人类	没有	底物 抑制剂	细节