系统验证抗体绑定和蛋白质的亚细胞定位使用核和共焦显微镜。
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施C, Hjelmare M,诺伊曼B,约K, Pepperkok R, Uhlen M, Lundberg E
系统验证抗体绑定和蛋白质的亚细胞定位使用核和共焦显微镜。
J蛋白质组学。2012年4月3日,75 (7):2236 - 51。doi: 10.1016 / j.jprot.2012.01.030。Epub 2012年2月15日。
- PubMed ID
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22361696 (在PubMed]
- 文摘
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我们已经开发出一种平台验证抗体绑定和使用核从免疫荧光技术获得蛋白质亚细胞定位数据结合自动化的共焦显微镜和图像分析。小干扰rna技术相结合与自动化的样品制备,自动成像和定量图像分析,高通量分析被设置来启用确认准确的蛋白质绑定和本地化以系统化的方式。在这里,我们描述的分析和验证65个人类蛋白质的亚细胞定位,有针对性的在130年到75年抗体和沉默siRNAs。的大部分(80%)的亚细胞位置,包括几个以前无特征蛋白质的位置,可以证实了抗体的显著下调小干扰rna沉默后的信号。设置使用自动图像分析定量分析来促进目标的研究中发现多个隔间。小干扰rna沉默使用平台的结果证明结合抗体的定量图像分析信号在不同的隔间的细胞是一个有吸引力的方法,以确保准确的蛋白质定位以及使用免疫荧光抗体绑定。大部分的人类蛋白质组仍然未知,我们建议这个方法是非常重要的持续工作下的人类蛋白质组在亚细胞水平上的映射。