识别Asp174和Asp175作为人类的主要催化残基O-GlcNAcase基因定点突变体的功能分析。
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Cetinbas N, Macauley女士,斯塔布斯KA Drapala R, Vocadlo DJ
识别Asp174和Asp175作为人类的主要催化残基O-GlcNAcase基因定点突变体的功能分析。
生物化学。2006年3月21日,45 (11):3835 - 44。
- PubMed ID
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16533067 (在PubMed]
- 文摘
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O-GlcNAcase家庭84 beta-N-acetylglucosaminidase催化的水解乳沟beta-O-linked 2-acetamido-2-deoxy-d-glycopyranose (O-GlcNAc)丝氨酸和苏氨酸残基的蛋白质转译后的修改。O-GlcNAcases使用双作用机制涉及瞬态二环恶唑啉中间体的形成和分解。任何家庭的关键催化残基84酶促进这个反应,然而,是未知的。两个突变体的人类O-GlcNAcase D174A D175A,生成自84年这些残留物中高度保守的家庭糖苷水解酶。Structure-reactivity D174A突变酶的研究揭示了严重跨广泛的催化活性基质与pH-activity概要文件符合删除一个关键催化残基。D175A突变酶显示显著降低催化效率与基质轴承贫穷离开团体(3000倍),而对于亚态轴承好领导班子的差异要小得多(7倍)。这个突变体酶也劈开thioglycosides与野生型酶催化效率本质上是相同的。叠氮化,添加作为一个外生亲核试剂增加这种酶对底物的活动轴承一个很好的离去基团。在一起,这些结果允许Asp(174)明确任务的剩余极化2-acetamido组的攻击异头中心和Asp(175)的残渣作为一般的酸/碱催化剂。因此,家庭84年糖苷水解酶使用DD催化对催化的影响。