Caco-2细胞中p -糖蛋白配体表观亲和性定量的功能测定。
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高俊，吴濑，李志强，李志强，李志强
Caco-2细胞中p -糖蛋白配体表观亲和性定量的功能测定。
Pharm Res. 2001 Feb;18(2):171-6。
- PubMed ID
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11405287 (PubMed视图］
- 摘要
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目的:开发一种简便的功能测定方法，用于定量测定Caco-2细胞单层中与p -糖蛋白(P-gp)紫杉醇结合位点相互作用的化合物的表观亲和力。方法:采用转运抑制法测定化合物对P-gp的已知底物[3H]-紫杉醇的主动转运的抑制作用。根据化合物对[3H]-紫杉醇主动转运的抑制作用，定量测定了化合物的表观亲和性(K(I)值)。利用完整的Caco-2细胞单层进行转运抑制研究。采用液体闪烁计数法对样品进行分析。结果:[3H]-紫杉醇(0.04 microM)在基底外侧(BL)到根尖(AP)方向的通量比AP到BL方向的通量快10-20倍左右。在培养培养基中加入(+/-)-维拉帕米(0.2 mM)，一种已知的P-gp抑制剂，可以完全消除[3H]-紫杉醇通量的差异。然而，在相同的条件下，包含已知的多药耐药相关蛋白(MRP)抑制剂probenecid (1.0 mM)，对[3H]-紫杉醇的转运没有显著影响。这些结果表明，P-gp参与了紫杉醇的转运，而不是MRP。奎尼丁、柔红霉素、维拉帕米、紫杉醇、阿霉素、长春碱、依泊苷和塞利洛尔被检测为[3H]-紫杉醇bl - ap转运的抑制剂，得到的K(I)值分别为1.5+/-0.8、2.5+/-1.0、3.0+/-0.3、7.3+/-0.7、8.5+/-2.8、36.5+/-1.5、276+/-69和313+/-112 microM。 With the exception of that of quinidine, these K(I) values were comparable with literature values. CONCLUSIONS: This assay allows a facile quantitation of the apparent affinities of compounds to the taxol-binding site in P-gp, however, this assay does not permit the differentiation of substrates and inhibitors. The potential of drug-drug interactions involving the taxol binding site of P-gp can be conveniently estimated using the protocol described in this paper.