人p -糖蛋白结合特性的表征:[3H]维拉帕米放射性寡聚结合试验的开发。
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Doppenschmitt S, Langguth P, Regardh CG, Andersson TB, Hilgendorf C, Spahn-Langguth H
人p -糖蛋白结合特性的表征:[3H]维拉帕米放射性寡聚结合试验的开发。
中华药物学杂志1999年1月2日(1):348-57。
- PubMed ID
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9862789 (PubMed视图］
- 摘要
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与吸收转运蛋白p -糖蛋白(P-gp)的相互作用可能是药物药代动力学特性的一个来源，包括剂量依赖性吸收、药物-药物相互作用、肠道分泌和血脑屏障的有限渗透性。在已建立的药物与P-gp相互作用的体外分析方法中，没有一种直接量化配体与P-gp的亲和力。相反，它们测量的是膜渗透和受体结合过程的结果;这可能会导致结果解释的困难。基于放射性寡配体结合测定原理，提出了一种定量药物对转运体亲和力的测定方法。这具有直接量化药物与P-gp相互作用的优点。由于多种底物与P-gp具有可逆性和竞争性相互作用，因此以[3H]维拉帕米和[3H]长春碱为放射配基，以人肠道Caco-2细胞为载体，在长春碱存在下培养或转染多药耐药基因MDR-1作为受体制备P-gp过表达，建立了放射配基结合测定方法。该检测在96孔板中进行，具有用作高通量方法的潜力。在长春碱存在下培养的Caco-2细胞中，P-gp的表达被明显诱导，在转染细胞中也是如此，尽管程度较低。两种放射性配体都能与P-gp结合。 Verapamil was the radioligand of choice for further investigations due to its lower nonspecific binding to the transporter preparation. Kinetics as well as specificity of the binding of verapamil to the P-gp preparation were demonstrated. A two-affinity model was found to adequately describe the data derived from saturation as well as from competition experiments, in accordance with previous findings on two exsorption sites for P-gp. The binding properties of [3H]verapamil and [3H]vinblastine to a P-gp preparation derived from induced Caco-2 cells are described. The concentration-dependent displacement of the radioligand by nonlabeled substrates for P-gp should be a suitable principle for the determination of drug affinity to the respective binding sites at the human intestinal multidrug transporter P-gp.