肝钠依赖性牛磺胆酸转运蛋白稳定转染到不朽肝源细胞系和V79成纤维细胞的功能特征。
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Platte HD, Honscha W, Schuh K, Petzinger E
肝钠依赖性牛磺胆酸转运蛋白稳定转染到不朽肝源细胞系和V79成纤维细胞的功能特征。
中华细胞生物学杂志，1996 5月;70(1):54-60。
- PubMed ID
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8738419 (PubMed视图］
- 摘要
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胆汁酸通过主动的载体介导转运进入肝实质细胞。这种转运在永久生长的肝肿瘤细胞系的细胞转化过程中丢失。为了建立永久性哺乳动物细胞培养系统对胆胆酸的吸收，我们用三种不同的基因转移方法(磷酸钙沉淀、脂质体转染、电穿孔)转染了克隆的大鼠肝脏Na(+)-牛磺胆酸共转运多肽(Ntcp)的cDNA在中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)和“肝细胞样”细胞系HPCT-1F3中。观察到两个细胞基因组中cDNA的稳定整合。然而，在V79成纤维细胞中，牛磺胆酸盐运输的永久性功能表达没有实现。如果Ntcp通过电穿孔转染HPCT-1E3细胞，则牛磺胆酸钠依赖性摄取仅在HPCT-1E3细胞永久表达。在该细胞系(HPCT-1E3-TC-6/2)中，测量了转染的单转运蛋白的底物特异性、钠和能量依赖性以及动力学参数。添加非标记胆汁酸、布美他尼、磺溴眼素和寡霉素可抑制钠依赖性牛磺胆酸摄取。用10mmna(+)-丁酸钠预处理该细胞培养22小时，可使牛磺胆酸盐的摄取增加两倍。丁酸刺激细胞和未刺激细胞都不运输糖胆酸盐或胆酸盐。 Besides taurocholate a fluorescence-labeled taurocholate derivative, NBD-taurocholate, was taken up by the HPCT-1E3-TC cells. In conclusion, the specific gene transfer with the electroporation technique in combination with the "right" cell line, HPCT-1E3, has been successful for the permanent and functional expression of the Ntcp. This allowed direct monitoring of the solitary sodium-dependent taurocholate transport system in a "liver cell-like" environment.