净化人类的顶端共轭出口泵MRP2调整substrate-stimulated atp酶和功能描述。

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Hagmann W,算,康尼锡J,弗雷M, Zentgraf H,开普勒D。

净化人类的顶端共轭出口泵MRP2调整substrate-stimulated atp酶和功能描述。

欧元。1999 10月1日,265 (1):281 - 9。

PubMed ID

10491184 (在PubMed

]

文摘

多药耐药性MRP2蛋白(ABCC2)充当ATP-dependent共轭出口泵顶端膜极化细胞和授予的多药耐药性。纯化MRP2至关重要的详细的功能描述家庭成员的磷酸腺苷磁带(ABC)转运蛋白。在人类胚胎肾细胞(HEK293),我们有永久表示MRP2包含一个额外的c端6-tag(他的)。免疫印迹和免疫荧光分析检测MRP2 -(他)6 overexpressing克隆。隔离膜囊泡从MRP2 -(他)6-expressing细胞活跃在ATP-dependent运输的谷胱甘肽S-conjugate白三烯C4, photoaffinity-labelled 8-azido——alpha-32P ATP。MRP2 -(他)6是随着膜MRP2——(他)6芯和纯化同质性在三步过程使用固定化金属亲和色谱法、脱盐,immunoaffinity色谱法。纯的身份MRP2 -(他)6被女士胰蛋白酶的多肽的分析验证。纯化MRP2 -(他)6糖蛋白重组成proteoliposomes protein-dependent方式和显示功能活动作为ATP酶和ATP的公里2.1毫米和25 nmol ADP的Vmax x mg MRP2-1最低为1。这atp酶活性被氧化,减少谷胱甘肽和substrate-stimulated S-decyl-glutathione。未来的研究使用纯MRP2重组proteoliposomes应该允许进一步洞察分子参数导致MRP2传输函数和多药耐药性为运输和定义其细胞内的伙伴。

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药物转运蛋白

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