稳定的咪唑环- 195氯霉素乙酰转移酶的活性部位。
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穆雷IA, Lewendon肖西弗吉尼亚州
稳定的咪唑环- 195氯霉素乙酰转移酶的活性部位。
J生物化学杂志。1991年6月25日,266 (18):11695 - 8。
- PubMed ID
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2050670 (在PubMed]
- 文摘
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的咪唑- 195提出的通用基础机制中扮演着重要的角色的氯霉素乙酰转移酶(CAT)。二进制的结构复杂的CATIII氯霉素表明,两个不寻常的交互可能确定的侧链的构象- 195:(i)一个intraresidue其主链之间的氢键羰基质子化了的Nδ1的咪唑环和(2)面对面之间的范德华接触他- 195 Tyr-25咪唑组和芳香族侧链。Tyr-25也使得氢键,通过其酚羟基,羰基氧的衬底氯霉素。更换Tyr-25 CATIII公里的苯丙氨酸导致适度增加对氯霉素(从11.6到14.6 microM)和kcat患病率下降(599年至258年s - 1),表明过渡态绑定自由能贡献0.6千卡mol-1 Tyr-25之间的氢键和氯霉素。相比之下,替换的Tyr-25丙氨酸产量大大受损的一种酶的能力结合氯霉素(公里= 173 microM)。作为Ala-25 kcat猫也减少了(130 s - 1),芳基的损失导致69倍降低kcat /公里,对应于一个自由能贡献2.5千卡mol-1的绑定和催化作用。除了Tyr-25之间的氢键和氯霉素的损失,损失的底物亲和力Ala-25猫可能是一个直接后果的疏水性降低chloramphenicol-binding网站和/或损失的关键约束的精确构象催化咪唑。然而,与野生型的猫一样,失活Ala-25猫的亲和试剂3 -(溴乙酰)氯霉素是伴随着他的修改仅在Nε2 - 195。因此,结果表明,互变异构的咪唑环的稳定持续缺乏范德瓦耳斯相互作用Tyr-25的侧链,可能由于氢键之间的质子化了的Nδ1和他的羰基氧- 195。