乙酰胆碱酯酶的肟激活机制分析手性和诱变。
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黄L·拉迪奇Z, Bruggemann RJ,何西阿书N,伯曼哈,泰勒P
乙酰胆碱酯酶的肟激活机制分析手性和诱变。
生物化学,2000年5月16日,39 (19):5750 - 7。
- PubMed ID
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10801325 (在PubMed]
- 文摘
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有机磷灭活丝氨酸乙酰胆碱酯酶的共价反应活性中心。我们已经研究了一系列解决旋光异构体的复活methylphosphonate轭合物乙酰胆碱酯酶的两个肟,2-pralidoxime (2-PAM)和1 - (2 ' -hydroxyiminomethyl-1 '吡啶)3 - (4 ' -carbamoyl-1-pyridinium) (HI-6)。S (p)对映体的methylphosphonate酯更活性与酶形成共轭,我们发现的肟复活也显示S (p)和R (p)的偏好,这表明类似的取向phosphonyl氧气向oxyanion孔都需要高效的失活和再生。比较(S (p))的活化率(R (p)) -cycloheptyl, 3, 3-dimethylbutyl,异丙基methylphosphonyl轭合物表明,位阻的烷氧基组排除了简单访问肟四面体磷。为了便于访问,我们代替小的酰基侧链活性中心的口袋,发现Phe295Leu替换提高HI-6-elicited S (p)的活化率配合14倍,而Phe297Ile替代优先提高2-PAM复活高达125倍。复活的分数增强通过这些突变酰基的口袋里最大的共轭为最大的空间。相比之下,小的增强活化率被认为与这些突变体为R (p)配合,肟限制访问膦酸酯和次优的定位phosphonyl oxyanion洞中的氧气可能都缓慢的复活。这些发现表明,嵌入的共轭有机磷酸酯的约束内的活性中心峡谷是一个主要因素在影响肟访问和重新激活率。此外,个人肟在进攻方向不同,导致假定五价的过渡状态。因此,重新激活代理他们的功效取决于周围的空间大部分干预组四面体磷。