角色的酪氨酸158和赖氨酸165韩国仁荷的催化机理,结核分枝杆菌的enoyl-ACP还原酶。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
帕里克说,莫伊尼汉DP,肖G,汤奇PJ
角色的酪氨酸158和赖氨酸165韩国仁荷的催化机理,结核分枝杆菌的enoyl-ACP还原酶。
生物化学。1999年10月12日,38 (41):13623 - 34。
- PubMed ID
-
10521269 (在PubMed]
- 文摘
-
酪氨酸的角色158 (Y158)和赖氨酸165 (K165)韩国仁荷的催化机理,结核分枝杆菌的enoyl-ACP还原酶,已被调查。这些残留的基础上被确认为假定的催化残基结构和序列同源性与短链醇脱氢酶家族的酶。更换Y158与苯丙氨酸(Y158F)和丙氨酸(Y158A)结果在24——1500倍减少k (cat),分别而k (m)为基质,trans-2-dodecenoyl-CoA,不受影响。然而,值得注意的是,更换Y158丝氨酸(Y158S)结果与野生型酶的活动。动力学同位素效应研究表明,solvent-exchangeable质子的转移部分病原为野生型和Y158S酶,但不是Y158A酶。这些数据表明,Y158不正式的质子供体反应函数但可能功能作为亲电催化剂,稳定的过渡态通过氢键衬底羰基氢化物转移。Y158侧链的构象变化涉及到旋转的绑定enoyl提出了底物的酶作为反溶剂同位素效应的解释观察到的V / K (DD-CoA)当NADH或NADD用作还原剂。这些数据符合的最近出版结构C16脂肪酸衬底与韩国仁荷显示Y158氢连着衬底羰基和旋转位置它占据InhA-NADH二进制复杂[Rozwarski, d。Vilcheze C。Sugantino, M。比特曼,R。Sacchettini, j . c(1999)生物。 Chem. 274, 15582-15589]. Finally, the role of K165 has been analyzed using site-directed mutagenesis. Replacement of K165 with glutamine (K165Q) and arginine (K165R) has no effect on the enzyme's catalytic ability or on its ability to bind NADH. However, the K165A and K165M enzymes are unable to bind NADH, indicating that K165 has a primary role in cofactor binding.