动能、光谱和热力学特性的结核分枝杆菌皮质铁氧还蛋白还原酶同系物FprA。
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麦克莱恩KJ, Scrutton NS, Munro哦
动能、光谱和热力学特性的结核分枝杆菌皮质铁氧还蛋白还原酶同系物FprA。
j . 2003 6月1;372 (Pt 2): 317 - 27所示。
- PubMed ID
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12614197 (在PubMed]
- 文摘
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致病菌结核分枝杆菌的基因组序列显示大量的细胞色素P450酶,需要辅助氧化还原酶的催化功能(铁氧还蛋白还原酶和铁氧还蛋白)。最可能的铁氧还蛋白还原酶是由fprA编码,和它的结构类似于真核皮质铁氧还蛋白还原酶。克隆、表达和纯化的黄素酶产品fprA基因在大肠杆菌。FprA减少各种电子受体使用NADPH或NADH作为电子供体,但是优待NADPH的(明显的K (m)对NADH = 50.6 + / - -3.1 microM;NADPH = 4.1 + / - -0.3 microM从铁氰化物还原实验)。Stopped-flow FprA时尚的降低NADPH的研究证明增加黄素还原速度NADPH浓度较低(< 200 microM),符合第二个,活动明显的抑制,吡啶nucleotide-binding网站,类似于识别人类细胞色素P450还原酶(古铁雷斯、连、狼、Scrutton和罗伯茨(2001)生物化学40,1964 - 1975]。黄素削减NADH低于NADPH和显示双曲依赖NADH浓度(最大减速率(k(红色))= 25.4 + / - -0.7(1),明显的k (d) = 42.9 + / - -4.6 microM]。黄素由分子氧再氧化更快速NADH-reduced酶。还原滴定表明,酶谱特色形成一种典型的中性(蓝色)时尚只在降低NADPH,半醌与电子顺磁共振研究一致。半醌二阶的依赖关系形成的浓度FprA表明歧化反应包括氧化和two-electron-reduced FprA。 Titration of FprA with dithionite converts oxidized FAD into the hydroquinone form; the flavin semiquinone is not populated under these conditions. The midpoint reduction potential for the two electron couple is -235+/-5 mV (versus the normal hydrogen electrode), similar to that for adrenodoxin reductase (-274 mV). Our data provide a thermodynamic and transient kinetic framework for catalysis by FprA, and complement recent spectrophotometric and steady-state studies of the enzyme [Fischer, Raimondi, Aliverti and Zanetti (2002) Eur. J. Biochem. 269, 3005-3013].