在结核分枝杆菌泛酸酯合成酶活性位点残基腺苷酸的形成和稳定所需的中间。
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郑R,大坝TK,布鲁尔CF,布兰查德JS
在结核分枝杆菌泛酸酯合成酶活性位点残基腺苷酸的形成和稳定所需的中间。
生物化学,2004年6月8日,43 (22):7171 - 8。
- PubMed ID
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15170354 (在PubMed]
- 文摘
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泛酸酯合成酶(EC 6.3.2.1)催化ATP泛酸盐的形成,D-pantoate, beta-alanine在细菌、酵母、植物。三维结构测定泛酸酯合成酶的结核分枝杆菌His44表示特定的角色,His47, Asn69, Gln72 Lys160, Gln164残留在绑定的基质和pantoyl腺苷酸的中间体。评价的功能角色这些严格守恒的残留,我们建造六个Ala突变体和催化性能决定的。丙氨酸的替换只好,H47 N69, Q72, K160残留在结核分枝杆菌泛酸酯合成酶引起了大于1000倍酶活性降低,而Q164A突变展出50倍少活动。孤立的腺苷酸反应的速率在单一的营业额的研究也减少40 - 1000倍的替代与丙氨酸这六个氨基酸之一,表明这些残留的形成至关重要pantoyl腺苷酸的中间体。腺苷酸的泛酸盐的生成速率和下半年beta-alanine H44A反应无法测量,H47A, N69A, Q72A, K160A突变体和减少Q164A突变体的40倍。K160C突变酶的活性显著增强了烷基化与bromoethylamine半胱氨酸,进一步支持K160残留的关键作用pantoyl腺苷酸的形成。等温滴定微量热法分析表明,阿拉巴马州的替换H47或K160导致ATP酶的亲和力下降。这些结果表明,高度保守的His44, His47, Asn69, Gln72 Lys160和残留的形成和稳定至关重要pantoyl腺苷酸的中间泛酸酯合成酶的反应。