高效triple-helix-mediated photo-cross-linking在目标网站在一个可选择的哺乳动物的基因。

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Vasquez公里,Wensel TG,霍根我,威尔逊JH

高效triple-helix-mediated photo-cross-linking在目标网站在一个可选择的哺乳动物的基因。

生物化学。1996年8月20日,35 (33):10712 - 9。

PubMed ID

8718860 (在PubMed

]

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针对破坏基因组中特定的网站是一个有吸引力的方式操纵基因在哺乳动物细胞。测试的适用性三重螺旋的形成是实现精确定时在哺乳动物的基因位点专一的伤害,一个triplex-forming oligodeoxyribonucleotide (TFO)与高亲和力结合到一个特定的网站在仓鼠腺嘌呤phosphoribosyltransferase (APRT)基因与光化学反应修改补骨脂素衍生物4 -(羟甲基)4、5,8-trimethylpsoralen (HMT)。psorTFO1, TFO修改绑定与高亲和力APRT基因的第1内含子内目标站点。辐照后,photomonoadducts(即。,共价加合物psorTFO1目标双工)的一个链形成效率高(约50%)。引入5 ' tpa序列(首选网站psoralen-induced photo-cross-links)达到或接近三结导致photoadduct形成总量的提高效率和有效地形成产品的页面上变性电泳淌度预计三股photo-cross-links(即。、产品包含psorTFO1共价连接到链的双工)。验证了他们的身份,使交联(1)相同的电泳淌度的产品形成与双链的放射性标记的和(2)共同沉淀放射性标记的双链的变性后补充生物素化的链。此外,交叉连接是完全可逆的辐照后在254 nm,作为预期psoralen-mediated交叉连接。的产量和分布photoadducts取决于5 ' tpa的位置。最有效的photoadduct形成(大约90%)和photo-cross-link形成(大约90%的总photoadducts)观察了5 ' tpa毗邻三层结,意义重大,但低,交联效率在三结的碱基对。 Molecular models of the psoralen-conjugated triplex with its six-carbon linker suggested a simple explanation for this distance dependence: facile intercalation near the triplex/duplex junction, with increasing strain required for intercalation at more distant sites. These results indicate that psorTFO1 allows for DNA damage with high precision and high efficiency, and the likely proportion of monoadducts and cross-links can be estimated from the target sequence.

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药物靶点

药物	目标	类	生物	药理作用	行动
Trioxsalen	DNA	核苷酸	人类	是的	交联/烷基化	细节